一、EDTA-胰蛋白酶的配制实验简介：EDTA-胰蛋白酶的配制实验所需的EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。它通常与胰蛋白酶结合使用。原因是钙和镁等金属离子会降低胰酶的活性，因此在使用胰蛋白酶消化液时应添加EDTA。它可以螯合这些离子并消除胰酶的**作用。二、EDTA-胰蛋白酶的配制实验所需材料及试剂：PBS,氢氧化钠,EDTA,三、EDTA-胰蛋白酶的配制实验步骤：1.磷酸酶的质量/体积比为％，即将。注意，尽量不要用水溶解，因为必须保持渗透压。％％，可根据细胞消化的难度进行调整。不需要EDTA，可以省略易于消化的细胞。EDTA对细胞粘附有影响，因此应大量使用。如果影响粘附，则必须将其用于消化，在用完全培养基终止消化后，离心并弃去上清液，然后添加完全培养基以进行培养以除去EDTA。如果不影响附着力，则不要离心。。用磷酸酶稀释PBS。4.请注意，血清可以阻止血浆酶的作用，但不能阻止EDTA。对于某些细胞，有必要在消化后停止离心。5.当pH约为8时，磷酸酶和EDTA**易溶解。在制备过程中，您可以先滴几滴氢氧化钠以将pH调整为8。请注意，磷酸酶会使溶液变酸，因此您应随时溶解时测量pH值。调整。请注意，不应添加过量的氢氧化钠，否则电池将无法承受碱的作用。在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。广西重组胰酶价格对比
0.25%胰酶是细胞生物学中常用的一种生物试剂，下面汇总一下胰酶使用过程中常见的一些问题。
胰酶的使用浓度是多少？胰酶浓度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。
胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。随着时间延长，胰酶的消化能力减弱。胰酶可分装冻存，在使用前从-20℃冰箱取出。尽量避免在4℃长期保存。胰酶使用的时候要注意什么？（1）在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。（2）胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。 广西重组胰酶价格对比胰酶细胞消化液具有方便快速的特点，通常室温消化1分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
胰酶细胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚红,不含Ca2＋和Mg2＋。该消化液已用0.22μm滤膜过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。本胰酶细胞消化液具有方便快速的特点,通常室温消化1分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。使用说明：贴壁细胞的消化：1、吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。2、加入少量胰酶细胞消化液（含酚红）,略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化,或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来；此时吸除胰酶细胞消化液；加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。4、如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。5、如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
0.25%胰酶是细胞生物学中常用的一种生物试剂，下面汇总一下胰酶使用过程中常见的一些问题。胰酶的使用浓度是多少？胰酶浓度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。为什么收到的胰酶会有颜色差异？商品化胰酶溶液需要用干冰运输，在运输过程中，胰酶溶液中的二氧化碳与干冰挥发的二氧化碳可能会极少部分的气体交换，导致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚红作为PH值指示剂，因此胰酶PH的变化是肉眼可观察到的。由干冰运输过程中导致的PH值的变化很小，PH值会从7.2-8.0变化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的时候，溶液呈淡红色；PH值6.8左右时呈淡黄色。因此胰酶颜色的变化是由PH值的变化引起，归因于使用干冰运输。这种颜色的变化是行业普遍现象，在不同供应商的胰酶产品都会出现。不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
胰蛋白酶用法用量1.每次～5mg，用蒸馏水5～10ml溶解。2.一般应用：1次5000单位，每日1次肌注，用量酌情而定。为防止疼痛，可加适量普鲁卡因。局部用*视情而定，可配成溶液制剂（～，微碱性时活性**强）、喷雾剂、粉剂、油膏等，用作体腔内注射、患部注射、喷雾、湿敷、涂搽等。3.治蛇毒：取注射用结晶胰蛋白酶2000单位1～3支，加～（或注射用水）4～20ml稀释，以牙痕为中心，在伤口周围作浸润注射，或在肿胀部位上方作环状封闭1～2次。如病情需要可重复使用。若伤肢肿胀明显，可于注射本品30分钟后，切开伤口排毒减压（严重出血者例外），也可在肿胀部位针刺排毒。如伤口已坏死、溃烂，可用其***胰蛋白酶注意事项1.不可作静注。用前需作划痕试验，应注意可能产生过敏反应。2.吸取注射液后应另换针头，以免注射时疼痛。3.外用时，可采用注射用制剂以缓冲液溶解，但必须在3小时内用毕。胰蛋白酶不良反应：1．注射局部疼痛、硬结。2．本品可引起组胺释放，产生全身反应，有寒战、发热、***、头晕、胸痛、***、皮疹、血管神经性水肿、呼吸困难、眼压升高、白细胞减少等。症状轻时不影响继续***，给予抗组胺*和对症*物即可控制，严重时应即停*。3．本品偶可致过敏性休克。胰酶细胞消化液(不含EDTA)消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。广西重组胰酶价格对比
胰酶4℃保存，一年有效；-20℃可保存更长时间。广西重组胰酶价格对比
胰蛋白酶（Trypsin）简称胰酶，是一种丝氨酸水解酶，能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基端切断。在组织细胞的提取、培养，以及体外细胞培养过程中，均会使用到胰蛋白酶消化液，用于水解细胞间蛋白质，使组织或细胞离散成单个细胞。胰酶在37℃pH8.0条件下消化能力**强。常用胰酶工作浓度为0.25%。EDTA可以螯合钙镁离子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速细胞间连接蛋白的水解，起到增强消化的效果。酚红是一种pH指示剂，溶液偏碱性时呈紫红色，偏酸性时呈橘红色，近中性时呈粉红色。本产品为0.25%胰蛋白酶消化液，含0.25%胰蛋白酶，溶于Hank’s缓冲液，不含EDTA，无酚红指示剂，经0.22μm过滤除菌。广西重组胰酶价格对比
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